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Während der sexuellen Erregung wird im Schwellkörper des männlichen Glieds Stickstoffmonoxid freigesetzt, das auf biochemischem Weg über zyklisches Guanosin-Monophosphat cGMP die Entspannung der Muskulatur des Schwellkörpers hervorruft. In der Folge wird der Bluteinstrom in den Penis gesteigert und dadurch eine Erektion hervorgerufen. Vardenafil hemmt jenes Enzym, durch das cGMP abgebaut wird. Die daraus resultierenden erhöhten cGMP-Spiegel führen zu einer Steifheit des Penis. Vardenafil kann nur wirken, wenn sexuelle Stimulation vorliegt, da nur dann die Stickstoffmonoxid-cGMP-Reaktion ihren Anfang nimmt und cGMP die Grundlage für die Wirkung von Vardenafil darstellt.
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